幽门螺杆菌重组VacA-HpaA IgY的制备

• 作者: 叶翠莲 张绍兰 杨致邦 毛小琴 黄伟 黄进
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 重组蛋白 细胞空泡毒素抗原 黏附素 蛋黄抗体
• 年，卷（期）: 2006,（22）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2186-2191
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4899字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2006.22.007

摘要

目的:采用基因工程技术大量表达、提纯幽门螺杆菌(H pylori)细胞空泡毒素毒性片段,和黏附素片段的融合蛋白,以此为抗原,制备高效价的抗VacA-HpaA蛋黄抗体(IgY).方法:大量培养重组菌pQE30-VacA-HpaA-DH5α,诱导表达获得融合蛋白VacA-HpaA,Ni2+-NTA树脂纯化.将纯化的重组蛋白免疫鸡,水稀释法提取IgY,硫酸铵沉淀法纯化浓缩VacA-HpaA IgY.ELISA法测定抗体产生的时间-效价变化,SDS-PAGE分析纯度,Bradford法测定蛋白含量,Western blot检测其分别对VacA和HpaA抗原的特异性,ELISA法检测效价.结果:重组蛋白主要以包涵体形式表达,免疫鸡后提取的IgY可与该蛋白发生免疫反应,IgY效价总体上随免疫时间增加而升高.经纯化、浓缩后,获得纯度为60%左右,效价为1:12 800的VacA-HpaA IgY,蛋白浓度为22 g/L,Western blot显示在Mr27 000和Mr30 000处分别有相应条带,ELISA检测与VacA和HpaA反应的效价分别为1∶3200和1∶6400(P＜0.01).结论:成功制备了高浓度、高效价的抗重组VacA-HpaA的特异性IgY.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄伟	西南大学蚕学与生物技术学院	48	365	8.0	18.0
2	张绍兰	四川省成都医学院免疫学教研室	1	5	1.0	1.0