牛结核分支杆菌MB1916c基因的克隆和原核表达

• 作者: 赵德明 郝俊峰
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛结核分支杆菌 促复苏因子C MB1916c基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 博士后论坛
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: S851.618
• 字数: 4407字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-4333.2006.06.001

摘要

构建牛结核分支杆菌MB1916c的原核表达载体,获得了高纯度的融和表达蛋白.以牛结核分支杆菌DNA为模板,利用PCR方法扩增出牛结核分支杆菌MB1916c基因片段,将回收纯化后的产物克隆到pGEM-T载体,测序分析鉴定为阳性的质粒,经SacⅠ/KpnⅠ双酶切后与同样条件下双酶切后的pET-30a(+)载体连接,再转化到E.coli BL21(DE3)表达菌株中,经菌落PCR快速筛选克隆,以SacⅠ/KpnⅠ双酶切和测序分析鉴定.确定正确的阳性菌株IPTG诱导后,收集菌体进行SDS-PAGE和Western-blotting分析.结果显示:以牛结核分支杆菌DNA为模板,PCR后得到了MB1916c目的基因片段,经克隆、亚克隆、序列分析和SacⅠ/KpnⅠ双酶切鉴定,获得了牛结核分支杆菌MB1916c原核表达菌株,IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析可见约26 ku蛋白表达条带,Western-blotting分析证实所获得的蛋白具有牛结核分支杆菌的抗原性.本实验构建了pET-30a(+)-MB1916c原核表达载体,得到融合6个组氨酸残基的MB1916c蛋白纯度大于95%,为进一步研究其结构和功能奠定了基础.