重组牛肠激酶轻链基因在毕赤酵母中的表达与纯化

• 作者: 周振兴 曹志飞 李新平 李静 梅翔 范开
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组牛肠激酶 毕赤酵母 分泌表达 活性分析
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 5-8
• 页数: 4页
• 分类号: Q786|Q503
• 字数: 5563字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2006.01.002

摘要

目的:构建重组牛肠激酶轻链的基因工程菌,并进行表达和纯化,以获得高纯度和高活性的重组牛肠激酶轻链蛋白.方法:以GenBank公共数据库中的牛肠激酶轻链基因序列(Accession No.NM174439)设计引物,利用RT-PCR合成牛肠激酶轻链基因片段,并克隆进pPIC9K载体,同时在基因N端插进6个组氨酸标签,转化毕赤酵母GS115,进行筛选和诱导表达.产物经镍离子螯和层析和Q-Sepharose FF柱纯化,并酶切融合蛋白检测其活性.结果:培养液中重组牛肠激酶轻链蛋白表达量为3.0 mg/L.对含有肠激酶酶切位点的IL-11/MBP融合蛋白进行酶切,结果表明,酶解率可达到90%以上.结论:表达并获得了高纯度的重组肠激酶轻链蛋白,为大规模生产打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李静	苏州大学生命科学学院	55	148	8.0	10.0
2	曹志飞	苏州大学生命科学学院	17	63	5.0	7.0
3	李新平	苏州大学生命科学学院	24	127	6.0	10.0
4	范开		15	56	4.0	7.0
5	梅翔	苏州大学生命科学学院	3	10	2.0	3.0
6	周振兴	苏州大学生命科学学院	3	10	2.0	3.0