牙齿发育相关基因adam28多克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 文玲英 杨曦 赵征 轩东英 金岩
• 来源期刊: 实用口腔医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: adam28基因 融合蛋白 多克隆抗体 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 166-170
• 页数: 5页
• 分类号: R78
• 字数: 3946字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-3733.2006.02.007

摘要

目的:制备及鉴定抗ADAM28的多克隆抗体.方法:采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出adam28基因的蛋白编码区序列,克隆到中间载体pMD18-T Vector中,再经双酶切得到adam28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,在大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达,得到GST-ADAM28融合蛋白,经过初步纯化及SDS-PAGE电泳,在35 300的新蛋白带处直接割胶,作为抗原免疫新西兰大白兔后获取抗体.结果:成功构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,得到初步纯化的GST-ADAM28融合蛋白,免疫兔子1 个月后,获得免疫血清,盐析法纯化得到多克隆抗体.Western印迹结果显示所得到的抗体具有较高的特异性,ELISA分析证实其效价可达1:16 000.结论:成功制备出高效价的抗ADAM28多克隆抗体,为进一步研究ADAM28在牙齿发育中的作用和表达分布奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金岩	西安第四军医大学组织工程研发中心	47	368	11.0	17.0
2	文玲英	西安第四军医大学口腔医学院儿童口腔科	18	137	7.0	11.0
3	赵征	西安第四军医大学口腔医学院儿童口腔科	2	2	1.0	1.0
4	轩东英	西安第四军医大学组织工程研发中心	2	7	2.0	2.0
5	杨曦	西安第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室	1	2	1.0	1.0