大鼠GAD65基因的克隆与原核表达

• 作者: 刘启才 吴晓蔓 孙卫文 林勇平 郑小玲 陈盛强
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: GAD65 原核表达 克隆
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 675-678
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4069字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3619.2006.06.019

摘要

目的构建pGEX-6P-3/GAD65原核表达载体,获得大量纯化的大鼠GAD65蛋白.方法通过RT-PCR技术从大鼠脑组织中扩增GAD65 cDNA,克隆至PGEM-Teasy载体上并测序,利用引物上的BamHI与EcoRI酶切位点将GAD65基因插入PGEX-6P-3,转化大肠杆菌BL21,限制性内切酶消化鉴定.IPTG诱导重组菌株表达,用SDS-PAGE与Western-blot对表达产物进行鉴定,并用Sepharose4B亲和层析柱对表达产物进行纯化,PreScissionProteas酶对融合蛋白进行酶切.结果扩增的GAD65长度为1758bp,测序结果与已知序列吻合.重组子经酶切鉴定,获得PGEX-6P-3 GAD65原核表达菌株,获得分子量约91 000的PGEX-6P-3/GAD65融合蛋白,分离纯化出约65 000的GAD65蛋白,Western-blot表明重组蛋白能被GAD65单克隆抗体特异结合.结论成功获得GAD65蛋白,为研究GAD65生物学作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘启才		83	316	10.0	13.0
2	陈盛强		231	853	14.0	20.0
3	吴晓蔓		77	383	12.0	16.0
4	孙卫文		65	252	9.0	11.0
5	林勇平		52	264	10.0	14.0
6	郑小玲		21	77	6.0	7.0