pGL3-EPO-HRE报告基因质粒的构建及功能鉴定

• 作者: 修瑞娟 张静 李宏伟 苏燕
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 低氧诱导因子-1α 低氧反应元件 质粒构建 基因表达
• 年，卷（期）: 2006,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1220-1223
• 页数: 4页
• 分类号: R4
• 字数: 2639字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6325.2006.11.012

摘要

目的 构建串联低氧反应元件(HRE)报告质粒pGL3-EPO-HRE并进行功能验证.方法 按照人促红细胞生成素(EPO)基因3'末端HRE增强子序列,人工设计合成首尾2段3'末端部分互补的单链DNA,然后通过退火及延伸合成两端带有Mlu I和BglⅡ酶切位点的包含3个串联排布的HRE的双链DNA,克隆到T载体测序正确后,将其插入到pGL3-promoter报告载体.构建好的pGL3-EPO-HRE分别与pcDNA3-HIF-1α和pcDNA3共转染MCF-7细胞,经氯化钴(CoCl2)作用24h后测定报告基因的活性.结果 质粒测序及酶切结果正确,瞬时转染实验显示,在常氧条件下,CoCl2及pcDNA3-HIF-1α可以使pGL3-EPO-HRE报告基因的活性增高约10倍(P＜0.01),而且两者共同作用可以使报告基因的活性进一步增高约30倍(P＜0.01).结论 pGL3-EPO-HRE可以与低氧诱导因子-1(HIF-1)结合并被激活,可以用来鉴定和检测细胞中HIF-1的表达及蛋白活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苏燕		3	12	2.0	3.0
2	修瑞娟		10	40	3.0	6.0
3	李宏伟		4	23	2.0	4.0
4	张静		3	6	2.0	2.0