幽门螺杆菌glmM DNA重组质粒的构建及体外表达

• 作者: 丁惠 佘菲菲 吴小茜 张静 陈月秀
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 glmM 重组质粒 表达
• 年，卷（期）: 2006,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 617-620
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3002字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2006.07.006

摘要

目的构建幽门螺杆菌(Hp)pVAX1-glmM DNA重组质粒,体外转染SGC-7901细胞并鉴定其表达蛋白的抗原性.方法 RT-PCR方法从国际标准株NCTC11637中获取glmM全长基因,克隆插入T载体.测序后经酶切、连接反应将glmM的开放读码框架定向克隆入真核表达载体pVAX1,酶切初步鉴定后测序确认.通过脂质体法将pVAX1-glmMDNA重组质粒转染SGC-7901细胞,检测其转染效率,确定转染成功后RT-PCR法检测glmM在转录水平的表达,ELISA法鉴定表达蛋白的抗原性.结果DNA测序结果显示扩增出的glmM全长基因与GenBank公布的Hp glmM序列有96%的同源性.PCR、酶切和测序结果证实glmM目的基因成功克隆入真核表达载体pVAX1.重组质粒转染的细胞经RT-PCR扩增获得1.4kb片段,与目的基因大小相符.ELISA结果显示重组质粒转染细胞的超声破碎物及培养上清液中抗原的滴度比对照组高2倍以上.结论成功构建了pVAX1-glmM DNA重组质粒,其表达蛋白具有良好的抗原性,为进一步研究其抗Hp感染的效果及制备相应有效DNA疫苗奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	佘菲菲	福建医科大学分子医学微生物学实验室	45	268	10.0	14.0
2	陈月秀	福建医科大学分子医学微生物学实验室	24	149	8.0	11.0
3	张静	福建医科大学分子医学微生物学实验室	25	126	6.0	10.0
4	吴小茜	福建医科大学分子医学微生物学实验室	12	40	3.0	5.0
5	丁惠	福建医科大学分子医学微生物学实验室	3	21	2.0	3.0