人线粒体核糖体蛋白S17 cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达和纯化

• 作者: 杨卫兵 杨希川 杨斌 郝飞 钟白玉
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 核糖体蛋白质类 DNA,互补 基因表达
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 42-44
• 页数: 3页
• 分类号: Q781
• 字数: 2979字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2006.01.014

摘要

目的克隆人MRPS17 cDNA,并在大肠杆菌中表达纯化.方法从人原代培养毛乳头细胞中分离总RNA,采用RTPCR及序列测定等方法获得人MRPS17 cDNA,然后克隆至原核表达载体pET28a,转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;C末端融合了6×His纯化标签的表达产物行Western印迹法分析并用Ni2+-NTA离子交换树脂进行纯化;纯化蛋白行SDS-PAGE纯度分析.结果获得了人MRPS17 cDNA,与GenBank报道的序列一致,并成功构建了高效原核表达质粒pET28a-MRPS17;Western印迹结果表明,经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达了分子量约13kD的目的蛋白;表达产物经Ni2+NTA离子交换树脂纯化,纯度＞90%.结论克隆得到了人MRPS17 cDNA,并在E.coli中成功表达和纯化了MRPS17蛋白,为后续研究奠定了基础.