人PPARγ-LBD cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达纯化

• 作者: 叶治家 巩燕 彭家和 曹廷兵 江渝
• 来源期刊: 生命科学研究
• 学科: 生物学
• 关键词: PPARγ PPARγ-LBD 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 36-40
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3793字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7847.2004.01.008

摘要

从正常中国人的面部脂肪组织分离总RNA,采用RT-PCR获得人的PPARγ-LBD cDNA,然后克隆至原核表达载体pET28a,构建高效原核表达质粒pET28a-PPARγ-LBD,序列分析表明正常中国人的PPARy-LBDcDNA序列与Gene Bank报道的序列一致.把构建的pET28a-PPARy-LBD质粒转化大肠杆菌BL2l(DE3),IPTG进行诱导表达,Westem blot检测表达产物,在相对分子质量34 kDa处有特异的蛋白表达条带,表达蛋白以可溶性和包涵体方式存在.在N末端融合6×His纯化标签的表达产物用Ni2+ -NTA离子交换树脂进行纯化,纯化蛋白进行SDS-PAGE纯度分析大于90%以上.因此,获得了正常中国人的PPARγ-LBD cDNA序列,并且在E coli中成功表达和纯化了PPARγ-LBD蛋白.