人肝素酶基因正反义荧光真核表达载体的构建及肝癌细胞转染

• 作者: 房殿春 李志宏 李晶晶 杨仕明 王东旭 罗元辉 蔡永国 陈陵
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肝素酶 荧光真核表达载体 转染
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 47-49
• 页数: 3页
• 分类号: R394-33|R394.2|R735.7
• 字数: 2101字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.01.017

摘要

目的构建正义和反义人肝素酶绿色荧光蛋白真核共表达载体,并分别转染人低转移肝癌细胞株MHCC97-L及高转移细胞株MHCC97-H和HCCLM6.方法采用基因重组技术,用EcoR I从pcDNA3-Hpa质粒上切下约1.7kb的人肝素酶全长cDNA片段,然后连入pIRES2-EGFP质粒的EcoR I酶切位点上,经BamH I酶切鉴定出正义和反义表达载体,并进一步测序确认.用脂质体法将肝素酶正义真核表达载体转入人低转移肝癌细胞株MHCC97-L,反义真核表达载体转入人高转移肝癌细胞株MHCC97-H和HCCLM6,24 h后荧光倒置显微镜下检测转染结果.结果经BamH I酶切后,正义质粒形成5.3kb和1.7kb两条DNA片段,而反义重组质粒为6.5kb和O.5kb两条DNA片段,与理论计算值完全一致;测序结果进一步确认了方向的正确性.转染成功的肝癌细胞在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光.结论成功构建了人肝素酶的正、反义真核表达载体,并成功转染人低、高转移肝癌细胞株,为进一步研究正、反义肝素酶基因转染对肝癌细胞的转移能力的影响奠定了基础.