大鼠GLUT1基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建

• 作者: 刘然义 吴中华 张培峰 李军亮 李方成 梁伟强 袁开长
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 葡萄糖转运体1 基因扩增 重组腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2006,（11）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 2284-2286
• 页数: 3页
• 分类号: R363
• 字数: 2547字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2006.11.052

摘要

目的:构建携带大鼠葡萄糖转运体1基因(GLUT1)的复制缺陷型重组腺病毒载体,为进一步研究脑缺血缺氧引起的神经元死亡机制奠定基础.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法获取大鼠GLUT1基因全长cDNA,将其克隆至穿梭质粒pShuttle中构建穿梭质粒pShuttle-Glut1,经酶切后与线性化的腺病毒骨架质粒pAdeno-X体外连接并转化大肠杆菌DH5α,构建重组腺病毒质粒pAd-Glut1,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染HEK293细胞包装成重组病毒颗粒,重组腺病毒在HEK293细胞中反复扩增数代后,分别用聚合酶链反应(PCR)及免疫印迹法(Western blotting)从基因和蛋白表达水平鉴定重组的腺病毒.结果:经PCR分析及DNA测序显示GLUT1 cDNA序列正确;筛选出重组腺病毒质粒pAd-Glut1后在HEK293细胞中成功包装出重组病毒,包装后冻融细胞行PCR及Western blotting检测表明重组腺病毒包装成功.结论:成功扩增了大鼠GLUT1基因并构建了携带大鼠GLUT1基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,这有助于研究脑缺血缺氧引起的神经元死亡的机制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李方成	中山大学附属第二医院神经外科	42	199	8.0	11.0
2	梁伟强	中山大学附属第二医院整形外科	56	205	8.0	11.0
3	刘然义	中山大学肿瘤防治中心实验室	28	126	6.0	10.0
4	李军亮	中山大学附属第二医院神经外科	20	100	7.0	9.0
5	吴中华	中山大学附属第二医院神经外科	7	39	3.0	6.0
6	张培峰	中山大学附属第二医院神经外科	2	4	1.0	2.0
7	袁开长	中山大学附属第二医院神经外科	1	3	1.0	1.0