TAT/CT-1及TAT/EGFP融合蛋白的表达与纯化及其在小鼠体内分布的观察

• 作者: 周跃 张正丰 李兴鑫
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 心肌营养素-1 重组融合蛋白质 蛋白转导域 小鼠
• 年，卷（期）: 2006,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 648-651
• 页数: 4页
• 分类号: R394.3|R378.21|R349.64
• 字数: 3275字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.07.009

摘要

目的分别构建含蛋白转导域(protein transduction domain,PTD)TAT与小鼠心肌营养素-1(CT-1)及TAT与增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合基因片断的原核表达质粒TAT/CT-1及TAT/EGFP,利用大肠杆菌进行表达并纯化;观察融合蛋白在小鼠体内的分布.方法采用PCR及克隆技术将CT-1编码区基因以及EGFP基因分别与TAT连接到原核表达载体pGEX-4T3上.用IPTG诱导表达融合蛋白,谷胱甘肽琼脂糖4B纯化融合蛋白.小鼠尾静脉注射融合蛋白,脑、脊髓、肝、心肌等器官冰冻切片,免疫荧光观察融合蛋白的存在.结果目的片断CT-1及EGFP被有效的扩增,构建后质粒测序表明无PCR引起的突变,TAT/CT-1及TAT/EGFP在转化的大肠杆菌中获得高效表达,并成功纯化.脑、脊髓、肝、心肌等组织切片免疫荧光检测呈阳性.结论成功获得了有活性的TAT/CT-1及TAT/EGFP的基因表达产物;TAT可介导CT-1及EGFP由细胞外跨膜转导进入细胞内;为CT-1功能的进一步研究打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周跃	第三军医大学新桥医院骨科	354	4854	36.0	56.0
2	张正丰	第三军医大学新桥医院骨科	102	2107	22.0	43.0
3	李兴鑫	第三军医大学新桥医院骨科	2	5	1.0	2.0