pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP真核表达载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

• 作者: 刘英杰 孙露 李仁科 李杰 田海 蒋树林
• 来源期刊: 中国胸心血管外科临床杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基质金属蛋白酶组织抑制因子 真核表达载体 平滑肌细胞
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 126-131
• 页数: 6页
• 分类号: R541.4|Q789
• 字数: 4980字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4848.2007.02.012

摘要

目的 构建标记有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的人基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(hTIMP-1)真核表达质粒pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP,并通过转染大鼠血管平滑肌细胞(SMCs)验证hTIMP-1的表达.方法 将hTIMP-1及编码EGFP的互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列通过扩增、酶切、插入pcDNA3.1质粒的多克隆位点,构建pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP真核表达质粒;应用脂质体介导的基因转染技术,将基因导入SMCs(pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP转染组).应用荧光显微镜观察EGFP的表达情况;流式细胞仪检测转染效率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blotting)等方法检测hTIMP-1的表达情况;明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9活性.用空质粒pcDNA3.1转染SMCs(空质粒pcDNA3.1转染组)和未转染质粒的SMCs(未转染组)作为对照.结果 pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP转染组重组质粒转染SMCs后,SMCs生长受到抑制;转染24 h后在荧光显微镜下可见强绿色荧光,流式细胞仪检测转染效率约为15%;RT-PCR检测结果显示,SMCs出现646 bp目的基因;Western blotting检测显示,在转染后的血管SMCs中有hTIMP-1表达;明胶酶谱法检测结果显示,MMP-2、MMP-9活性降低;与空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 TIMP-1真核表达质粒的构建和在血管SMCs中的表达,为TIMP-1基因治疗的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蒋树林	哈尔滨医科大学附属第二医院心外科	85	246	7.0	12.0
2	孙露	哈尔滨医科大学附属第二医院心外科	19	124	5.0	11.0
3	田海	哈尔滨医科大学附属第二医院心外科	59	203	7.0	12.0
4	李杰	哈尔滨医科大学附属第二医院心外科	38	143	7.0	10.0
5	刘英杰	哈尔滨医科大学附属第二医院心外科	5	9	2.0	2.0