天然型EGFP在无细胞翻译系统中的可溶表达

• 作者: 朱海林 赵琪 黄学文
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 增强绿色荧光蛋白(EGFP) 重组载体 无细胞翻译系统 原核表达
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 225-227,231
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 2499字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2007.03.012

摘要

目的:构建能在无细胞翻译系统中表达天然型增强绿色荧光蛋白(EGFP)的原核表达载体.方法:以质粒pEGFP-N1为模板扩增EGFP基因,NcoI和HindⅢ双酶切EGFP基因和pET28a载体.T4 DNA连接酶连接,转化E.coli DH5α,提取载体,酶切和DNA测序鉴定.正确重组的载体命名为pET28a-EGFP.在无细胞翻译系统中加入大抽后的pET28a-EGFP模板(0.6 mg/ml),孵育3 h.荧光显微镜观察荧光.Western blot鉴定EGFP.结果:测序证实重组EGFP基因序列与基因库中的序列完全一致,荧光显微镜下观察到无细胞翻译系统中强烈荧光,Western blot证实分子量约为27 kD的EGFP高效表达.结论:成功构建了能在无细胞翻译系统中高效表达可溶性天然型EGFP的pET28a-EGFP载体,为进一步建立荧光强度标准物奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵琪	无锡市第一人民医院检验科	14	128	5.0	11.0
2	黄学文	华东疗养院检验科	13	54	3.0	7.0
3	朱海林	苏州大学医学院	1	4	1.0	1.0