可用体外翻译获得的可溶天然型EGFP的表达

• 作者: 安仙园 潘杰 诸葛洪祥 黄学文
• 来源期刊: 检验医学
• 学科: 医学
• 关键词: 增强绿色荧光蛋白 pET28a载体 重组载体 体外翻译系统 原核表达
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 微生物学检验论著
• 页码范围: 146-149
• 页数: 4页
• 分类号: R446.1
• 字数: 2078字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2007.02.016

摘要

目的 构建能在体外大量表达可溶性天然型增强绿色荧光蛋白(EGFP)的pET28a-EGFP原核表达载体.方法 以质粒pEGFP-N1为模板扩增EGFP基因,EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切EGFP基因序列和pET28a载体.T4 DNA连接酶连接,转化大肠埃希菌DH5α,提取载体,酶切和DNA测序鉴定.将pET28a-EGFP转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,观察荧光.体外翻译系统中加入重组pET28a-EGFP载体,孵育后观察荧光.免疫印迹法(Western blott)鉴定EGFP.结果 测序证实pET28a-EGFP中的EGFP基因序列与GenBank中序列完全一致,荧光显微镜下观察到大肠埃希菌BL21(DE3)和体外翻译系统中强烈荧光,West-ern blot结果显示相对分子质量约为27 000的EGFP高效表达.结论 成功构建了能在体内和体外稳定表达的可溶性天然型EGFP的pET28a-EGFP载体,为进一步体外筛选抑菌药物提供了可靠的报告载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	诸葛洪祥	苏州大学病原生物教研室	57	298	10.0	13.0
2	潘杰	苏州大学病原生物教研室	36	93	7.0	8.0
3	安仙园	华东疗养院检验科	5	2	1.0	1.0
4	黄学文	苏州大学病原生物教研室	2	2	1.0	1.0