结核分枝杆菌cfp10-esat6融合基因原核表达载体的构建及表达

• 作者: 刘刚 刘杨椅 姚卫 曾林子 李红霞 杨筠 王涛 田玉 陈建平
• 来源期刊: 生物医学工程学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 cfp10-esat6融合基因 rCFP10-ESAT6融合蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 636-640
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4146字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1001-5515.2007.03.036

摘要

构建结核分枝杆菌cfp10-esat6融合基因及其原核表达载体,在大肠杆菌中表达融合蛋白CFP10-ESAT6.用基因拼接(GeneSOEing)法扩增cfp10-esat6融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建原核表达重组质粒pGcfp10-esat6.重组子经限制性内切酶分析、聚合酶链式反应及测序鉴定后转化宿主菌大肠杆菌BL21,IPTG(isopropy-β-D-thiogalactoside,异丙基硫代-β -D半乳糖苷)诱导表达约42kDa带谷胱苷肽硫转移酶(Glutathione-S-Transferases GST)蛋白标签的rCFP10-ESAT6融合蛋白,经谷胱苷肽硫转移酶融合蛋白纯化试剂盒得到纯化的融合蛋白,产物进行SDS-PAGE电泳、Western-blot鉴定.重组质粒pGcfp10-esat6中目的基因测序结果与报道序列相同;在大肠杆菌中以可溶性非包涵体形式表达;表达量约占菌体总蛋白的40%,表达蛋白纯化后获得纯度为90%左右的重组蛋白;Western印迹结果证实重组蛋白与确诊的结核病患者血清发生特异免疫反应.本研究成功构建了原核表达载体pGcfp10-esat6,获得了rCFP10-ESAT6融合蛋白,为rCFP10-ESAT6融合蛋白在结核病诊断中的应用奠定了基础.