诱导T细胞免疫反应的日本血吸虫抗原表位的重组表达与免疫原性鉴定

• 作者: 何伟 余传信 华万全 李健 梁幼生 殷旭仁 许永良 高琪
• 来源期刊: 中国血吸虫病防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 抗原表位 重组表达 淋巴细胞增殖试验
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 241-246
• 页数: 6页
• 分类号: R383.24
• 字数: 5540字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-6661.2007.04.001

摘要

目的 对预测的日本血吸虫T细胞免疫反应表位进行合成与融合表达,并对其免疫原性进行分析.方法 根据3个表位(P7、P17、P18)的基因序列,人工合成正、负链寡核苷酸序列,使正链的5'端带有Nco I酶切位点,负链的3'端带有Xho I酶切位点.将每条表位肽的正、负寡核苷酸链退火形成双链DNA后,定向克隆入表达载体pET32c(+),电转化至 E.coli DH5α,经PCR、酶切及DNA序列分析鉴定出分别含有P7、P17、P18序列的重组质粒.提取重组质粒电转化至E.coli BL21(DE3)中,用异丙基硫代-β-D半乳糖苷对表位肽融合蛋白进行诱导表达,经12%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳对表达产物进行分析.表位肽融合蛋白用Ni2+螯合亲和层析胶纯化.同时根据P7、P17及P18的氨基酸序列人工合成这3个表位肽段.用纯化的表位融合蛋白、人工合成的表位肽体外刺激紫外线致弱尾蚴免疫C57BL/6J小鼠脾细胞,3H-TdR掺入法检测其刺激淋巴细胞的增殖效果.结果 P7、P17、P18 3个表位肽基因序列被成功克隆到pET32c(+)中并获得重组质粒,重组质粒均能表达大小约20 kDa的融合蛋白.表达产物用Ni2+亲和层析胶纯化后获得纯化的肽融合蛋白.表位P7、P17重组蛋白或合成肽均能有效刺激小鼠淋巴细胞增殖.结论 P7、P17肽段是日本血吸虫的T细胞抗原表位.