剪接因子SRp55原核表达质粒的构建和表达

• 作者: 刘飞 尹晓敏 施建华
• 来源期刊: 南通大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: SRp55 Tau 原核表达 剪接因子
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 79-82
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 3455字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7887.2007.02.001

摘要

目的:本研究通过扩增剪接因子SR蛋白家族的SRp55基因,构建GST融合蛋白原核表达质粒pGEX-2T/SRp55,并在大肠杆菌中诱导表达并进行纯化.方法:用PCR法扩增SRp55基因,将扩增产物和载体pGEX-2T进行双酶切后回收,连接载体和目的片段,获得重组质粒.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3).在大肠杆菌BL21(DE3)中通过IPTG进行诱导表达,然后用谷胱甘肽-琼脂糖球珠,亲和纯化得到纯的GST-SRp55融合蛋白.结果:SRp55基因以正确的阅读框架插入pGEX-2T.IPTG诱导大肠杆菌BL21(DE3)表达,随诱导时间的增加蛋白表达量增高,4 h以后接近最高表达量.通过亲和纯化得到分子量在60 kD左右的蛋白,经蛋白印迹分析证实为GST-SRp55融合蛋白.结论:成功地构建了GST融合蛋白原核表达质粒pGEX-2T/SRp55,并获得GST-SRp55融合蛋白,为进一步研究tau蛋白可变剪接机制提供了必要的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	施建华	南通大学江苏省神经再生重点实验室	16	107	6.0	10.0
2	刘飞	南通大学江苏省神经再生重点实验室	21	61	5.0	7.0
3	尹晓敏	南通大学江苏省神经再生重点实验室	9	57	4.0	7.0