慢病毒载体的构建及其介导的绿色荧光蛋白在胰岛β细胞中的表达

• 作者: 吕京澴 朱剑 汪振诚 王婷
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 慢病毒载体 胰岛β细胞 转染 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 498-501
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 2622字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2007.06.007

摘要

目的 获得能够在大鼠胰岛β细胞中高效表达的慢病毒载体.方法 以PCR的方法扩增绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)片段,并将其通过穿梭质粒装入pLenti6/V5表达质粒,然后用脂质体转染试剂将plenti6/V5 GFP、pLP1、pLP2以及pLP/VSVG转染入293FT细胞,获得的病毒用人纤维瘤细胞系的HT1080细胞进行滴定.然后用一定滴度的慢病毒转导大鼠胰岛β细胞系INS-1,观察转导效率.结果 通过限制性内切酶和琼脂糖凝胶电泳方法,观察到所克隆入pLenti6/V5表达质粒的GFP片段大小正好与PCR扩增出的片段一致.经测序验证,序列与NCBI网站上GFP序列完全一致.转染结果显示,经293FT细胞所产生的慢病毒,转导效率达到80%以上.而在1×106/ml病毒颗粒的情况下,AAV-GFP病毒几乎不能转导β细胞.结论 与同一滴度的AAV-GFP病毒相比,胰岛β细胞的转导效率有非常显著的差异.即慢病毒载体表达系统在对胰岛β细胞转导的能力上,明显优于重组腺辅病毒表达系统.表明慢病毒载体在糖尿病基因治疗中,特别是对胰岛β细胞的转基因工作中,有着良好的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王婷	南京医科大学基础医学院细胞生物与医学遗传学系	30	150	5.0	11.0
2	吕京澴	南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系	9	32	4.0	5.0
3	朱剑	南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系	23	199	8.0	13.0
4	汪振诚	南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系	2	8	1.0	2.0