华东黄杉ISSR引物反应体系的优化与筛选

• 作者: 刘晓燕 朱笃 李思光 江玉梅 陈晖 鲁顺保
• 来源期刊: 江西农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 华东黄杉 ISSR 引物筛选
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 生物技术及食品与土壤科学
• 页码范围: 1021-1025
• 页数: 5页
• 分类号: S791.16
• 字数: 3615字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2286.2007.06.034

摘要

在研究华东黄杉(Pseudotsuga gaussenii Flous)的遗传多样性过程中,为了获得清晰、重复性好的ISSR扩增结果,对影响ISSR-PCR的多个因素包括模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq 酶的用量、退火温度和循环次数等指标进行了筛选和优化,确定了华东黄杉ISSR-PCR分析的最佳扩增条件为:20 μL PCR反应体系中,2 μL 10×Taq 酶配套缓冲液,1.5 U Taq 聚合酶(上海Promega公司),1.5～2.5 mmol/L MgCl2,0.2 μmol/L引物,0.2 mmol/L dNTPs,10ng/L模板DNA.用来自江西三清山的4个个体,以100个ISSR引物进行PCR扩增,筛选出扩增效果较好的12个引物.