人热休克蛋白70的原核表达和纯化的实验研究

• 作者: 应敏刚 林绍峰 谢云青 郑秋红
• 来源期刊: 实用癌症杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 热休克蛋白70 基因重组 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 228-230,234
• 页数: 4页
• 分类号: R73-34
• 字数: 2501字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-5930.2007.03.003

摘要

目的 在大肠杆菌中表达人源性热休克蛋白70基因并纯化表达产物.方法 以人HSPO cDNA为模板,采用PCR方法进行扩增,将PCR产物克隆到表达载体pET30a上,将重组质粒pET30a-HSP70转化大肠杆菌B121上,经IPTG诱导后,表达产物进行SDS-PAGE及Western blot验证并纯化.结果 应用PCR方法扩增出约1 900 bp的目的片段;经酶切鉴定和DNA测序证实,HSP70基因成功地克隆到原核表达载体pET-30a上;转入重组质粒的大肠杆菌经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE,发现在分子量约为70 kD处有蛋白表达,Westem blot证实其为目的蛋白,纯化后的HSP70纯度达到90%以上.结论在大肠杆菌中已成功地表达了HSP70蛋白并且经过纯化,为研究HSP70的结构、功能及临床应用提供了必要条件.