CEL Ⅰ酶的粗纯化及活性分析

• 作者: 夏庆友 杨瑜 林立鹏 林英 赵萍 陈冬妹
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: CELⅠ酶 粗纯化 活性分析 targeting induced local lesions in genomes(TILLING)
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1006-1011
• 页数: 6页
• 分类号: S188
• 字数: 4364字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2007.06.017

摘要

TILLING(targeting induced local lesions in genomes)技术作为反向遗传学的一个重要研究工具,其中CEL(celery)Ⅰ酶是TILLING技术的核心内切酶.实验通过硫酸铵沉淀、亲和层析、阴阳离子交换柱层析等常规的蛋白质纯化过程,从芹菜(Apium graveolens)中粗纯化了CELⅠ酶.以杂合双链DNA为底物,检测了CELⅠ酶在不同纯化程度、不同温度、不同处理时间以及有无Taq DNA聚合酶条件下的错配切割活性.结果表明,所获得的CELⅠ酶得到了粗纯化;CELⅠ酶的最适活性温度范围为45～50 ℃;处理时间长达150 min时,CELⅠ酶仍能特异识别并切割错配碱基;在含有Taq DNA聚合酶的酶切体系中,CELⅠ酶错配切割效果更佳.与其它单位提供的CELⅠ酶活性相比,实验粗分离纯化的CELⅠ酶的酶切条带更亮,说明其活性更好.通过对CELⅠ酶的提取及活性分析,为TILLING技术大规模和低成本地应用于家蚕功能基因组研究提供了保障.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏庆友	西南大学生物技术学院农业部蚕桑学重点开放实验室	103	602	14.0	20.0
2	林立鹏	西南大学生物技术学院农业部蚕桑学重点开放实验室	7	57	4.0	7.0
3	赵萍	西南大学生物技术学院农业部蚕桑学重点开放实验室	33	235	9.0	14.0
4	林英	西南大学生物技术学院农业部蚕桑学重点开放实验室	18	87	5.0	9.0
5	陈冬妹	西南大学生物技术学院农业部蚕桑学重点开放实验室	5	40	3.0	5.0
6	杨瑜	西南大学生物技术学院农业部蚕桑学重点开放实验室	11	52	4.0	7.0