用Red系统敲除大肠杆菌O157:H7的ecs4553以及ecs4563基因

• 作者: 凌焱 刘徐兵 周围 张书祥 张京生 张部昌 李玉霞 梁龙 段海清 胡伟
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: 大肠杆菌O157:H7 ecs4553基因 ecs4563基因 Red同源重组
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 101-106
• 页数: 6页
• 分类号: R378.21
• 字数: 5540字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2007.02.001

摘要

目的:用Red系统快速敲除肠出血性大肠杆菌O157:H7中的分子伴侣基因,构建EHEC O157:H7的突变体.方法:本研究首先合成一对引物(每一条的5'端与ecs4553或者ecs4563基因同源,3'端与卡那霉素抗性基因同源),用pKD4为模板扩增出带有卡那霉素抗性基因的PCR产物,然后电击转化至大肠杆菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过卡那霉素抗性基因两侧的ecs4553或者ecs4563基因序列在体内与ecs4553或者ecs4563基因发生同源重组,置换掉基因组中的ecs4553或者ecs4563基因,最后利用卡那霉素抗性基因两端的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将卡那霉素抗性基因剔除.结果:获得了ecs4553或者ecs4563基因被精确敲除且不带卡那霉素抗性基因的EHEC O157:H7突变菌株.结论:为进一步研究EHEC O157:H7的致病机制奠定了基础.