东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库的构建

• 作者: 傅志强 刘金明 孙毅 孙焕 李浩 林矫矫 石耀军 苑纯秀 蔡幼民 贾人初 陆珂
• 来源期刊: 中国血吸虫病防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 T7噬菌体展示cDNA文库 东方田鼠 肺脏
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 252-256
• 页数: 5页
• 分类号: R383.24
• 字数: 5831字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-6661.2007.04.003

摘要

目的 构建东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选东方田鼠抗血吸虫感染抗性相关基因奠定基础.方法 用TRIzol试剂提取东方田鼠肺脏总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA.在双链cDNA 末端加上定向EcoRⅠ/Hind Ⅲ接头并用EcoRⅠ和Hind Ⅲ消化,使其两端分别带EcoRⅠ和Hind Ⅲ黏性末端.用Mini Column纯化,收集300 bp以上的双链cDNA 片段,再连接于带有EcoRⅠ和Hind Ⅲ末端的T7 Select 10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示cDNA文库.结果 经测定,库容量为1.5×106 pfu,扩增后文库滴度为1.1×1012 pfu/ml.对从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为91%,阳性克隆片段长度分布在200～1500 bp,其中有90%的插入片段＞300 bp.结论 成功构建了东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库.