重组hTRAIL腺病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 孙茂盛 施锐 易山 李鸿钧 杨芳 谢天宏
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 重组腺病毒 基因治疗 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2007,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 637-641
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3711字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2007.09.002

摘要

目的 构建表达hTRAIL基因的重组腺病毒载体.方法 以重组质粒pThioHisA-TRAIL中提取的TRAIL基因为模板,采用PCR法扩增基因片段.将扩增的基因片段插入穿梭质粒pShuttle-CMV,并转化大肠肝菌DH5α.筛选重组质粒pShuttle-CMV-TRAIL,电转化已转化了pAdEasy-1的BJ5183细胞.筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-TRAIL,用Lipofectamine转染293细胞,制备携带人全长TRAIL基因的重组复制缺陷型腺病毒(Ad-TRAIL).氯化铯密度梯度离心法纯化Ad-TRAIL病毒颗粒,并测定病毒滴度.采用RT-PCR法检测TRAIL基因在293细胞中的转录.以Ad-TRAIL转染YTMLC细胞,采用免疫荧光法和流式细胞术检测TRAIL基因的表达.结果 纯化后的Ad-TRAIL病毒颗粒数为2.77×1012VP/ml,感染性滴度为109.5(3.2×109)CCID50/ml.经RT-PCR扩增出约843bp的基因片段,与目的片段大小一致.流式细胞术和免疫荧光法均检测到TRAIL在YTMLC细胞中的表达,表达产物主要存在于细胞质中.结论 已成功构建了表达hTRAIL重组腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗提供了依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙茂盛		46	209	8.0	10.0