pTARGET-TCR Vβ5.2真核表达质粒的构建及表达

• 作者: 刘振龙 李蕴 赵文明 马丽平
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: T细胞受体 真核表达载体 胶原诱导性关节炎
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 97-100
• 页数: 4页
• 分类号: R593.22
• 字数: 3700字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8861.2007.01.028

摘要

目的 构建含大鼠TCR Vβ5.2基因的重组真核表达质粒.方法 以RT-PCR法扩增Lewis大鼠脾脏淋巴细胞的TCR Vβ5.2基因片段,将目的基因直接克隆到真核表达载体pTARGET中,构建重组质粒pTARGET-TCR Vβ5.2.连接产物转化E.coli JM109细胞后进行蓝白斑筛选,并经菌落PCR和DNA测序进行鉴定.将重组质粒以肌注法免疫Balb/c小鼠,用RT-PCR和免疫组化方法分别检测重组质粒在注射部位的转录和表达.通过脂质体介导,将重组质粒转染COS-7细胞进行瞬时表达,用免疫细胞化学染色法检测目的基因在真核细胞内的表达.结果 测序鉴定证实,TCR Vβ5.2基因已被正确插入到pTARGET载体中,并检测到肌肉组织和COS-7细胞内目的蛋白的表达.结论 成功构建了重组真核表达质粒pTARGET-TCR Vβ5.2,为进行TCR VβDNA疫苗对胶原诱导性关节炎大鼠保护作用的研究提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵文明	首都医科大学免疫学系	45	291	11.0	15.0
2	李蕴	首都医科大学免疫学系	25	132	6.0	10.0
3	刘振龙	首都医科大学免疫学系	19	121	6.0	10.0
4	马丽平	首都医科大学免疫学系	2	11	2.0	2.0