pSecTag-EGFP真核表达载体的构建及其转染鸡胚胎成纤维细胞条件的优化

• 作者: 史卫峰 崔英杰 杜立新 杨娜娜 赵晓民
• 来源期刊: 泰山医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 真核表达载体 鸡胚胎成纤维细胞 增强绿色荧光蛋白 脂质体 转染
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 586-588
• 页数: 3页
• 分类号: Q782
• 字数: 2133字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-7115.2007.08.003

摘要

目的 构建含报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)的分泌型真核表达载体pSecTag-EGFP,用以研究pSecTag/HygroB转染鸡胚胎成纤维细胞的转染效率,为目的基因的成功表达奠定基础.方法 用PCR方法克隆得到EGFP基因,通过酶切、连接、转化构建pSecTag-EGFP分泌型真核表达载体,设计优化实验,通过脂质体介导的方法转染鸡胚胎成纤维细胞,在荧光显微镜下直接观察该基因的表达.用Bradford法检测不同组合的细胞培养液中的EGFP蛋白的相对含量.结果 脂质体介导的方法能有效转染鸡胚胎成纤维细胞,实验中EGFP蛋白相对表达量随质粒量的增加而明显升高(P＜0.01).其中脂质体2μl、质粒1.0μg时目的蛋白相对表达量最高.结论 pSecTag-EGFP质粒构建成功,并成功优化了转染条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	史卫峰	泰山医学院生命科学研究所	19	70	6.0	7.0
2	杨娜娜	泰山医学院生命科学研究所	31	96	6.0	8.0
3	杜立新	中国农业科学院畜牧研究所	110	1652	21.0	37.0
4	崔英杰	泰山医学院生命科学研究所	17	74	6.0	8.0
5	赵晓民	泰山医学院生命科学研究所	78	482	13.0	18.0