猪胸膜肺炎放线杆菌结构蛋白基因ApxIVA特异性片段的表达和纯化

• 作者: 储岳峰 石琴 贺英 赵萍 逯忠新 高鹏程
• 来源期刊: 江西农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxIVA,表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 246-249,256
• 页数: 5页
• 分类号: S828|Q344+.13
• 字数: 2423字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2286.2007.02.017

摘要

以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清8型分离株Hpn-405株基因组DNA为模板,PCR方法扩增ApxIVA特异性片段,PCR产物经纯化后与载体pMD18-T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建成重组表达质粒pET-ApxIVA3,转入到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中,以IPTG进行诱导重组蛋白的表达,SDS-PAGE检测结果显示,表达的融合蛋白分子质量约为18 ku,与预期片段大小相符;将经过超声破碎的菌液离心取沉淀经尿素洗涤溶解后用镍金属螯合层析柱进行纯化.Western-blot分析证实,该融合蛋白具有免疫学活性.