用反式互补表达载体实现全抗体在CHO-dhfr-细胞中的高效表达

• 作者: 俞炜源 孙志伟 安怀杰
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 双顺反子表达载体 二氢叶酸还原酶基因 弱化 全抗体
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 735-738
• 页数: 4页
• 分类号: Q78|R392.1
• 字数: 3375字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2007.05.003

摘要

目的:通过弱化筛选基因二氢叶酸还原酶基因(dhfr),构建双顺反子全抗体表达载体,实现全抗体在CHO细胞中的高效表达.方法:将dhfr基因分为分别编码1～105和106～187氨基酸残基的2部分,分别通过linker与亮氨酸拉链GCN4融合,分别通过内部起始位点序列与抗体轻重链基因偶联,构建成2个双顺反子表达载体pIRESLZdhfr-H和pIRESLZdhfr-L.用脂质体2000转染CHO-dhfr-细胞,用无次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷的IMDM筛选培养基筛选阳性克隆.结果:筛选到的阳性克隆表达水平为1.47～3.5μg/(106细胞·d),经氨甲蝶呤(MTX)梯度加压,在MTX浓度为5×10-8 mol/L时,表达水平达到11.5μg/(106细胞·d).结论:构建了基于亮氨酸拉链二聚化基础的dhfr弱化方式的双顺反子表达载体,实现了全抗体在CHO-dhfr-细胞中的高效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	俞炜源	军事医学科学院生物工程研究所	87	518	11.0	17.0
2	孙志伟	军事医学科学院生物工程研究所	68	390	10.0	16.0
3	安怀杰	军事医学科学院生物工程研究所	5	16	2.0	3.0