人AITRL胞外区基因克隆表达及重组蛋白生物活性分析

• 作者: 仝佳 唐莉 李龙 杨敏 毛朝明 王胜军 许化溪 许小朋 邱谷风 邵启祥 马洁
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 活化诱导的肿瘤坏死因子超家族配体 基因克隆 原核表达 重组蛋白
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 1059-1063
• 页数: 5页
• 分类号: R392.12
• 字数: 4288字
• 语种: 中文

摘要

目的:获得重组人活化诱导的肿瘤坏死因子超家族配体胞外区蛋白(sAITRL),分析AITRL蛋白的生物学功能.方法:从全长质粒AITRL-pMD18-T中扩增sAITRL cDNA,亚克隆至表达载体pQE30;将重组质粒转化至 E. coli M15,IPTG诱导蛋白表达;表达蛋白用Ni2+ -IMAC柱纯化、复性并Western blot鉴定,流式细胞仪检测sAITRL重组蛋白的结合活性,增殖试验分析sAITRL的生物学活性.结果:成功构建了sAITRL-pQE30原核表达载体;表达相对分子质量约15 KD的重组蛋白;sAITRL能与活化淋巴细胞上的天然受体AITR结合,低浓度的sAITRL能促进淋巴细胞的增殖,而在高浓度下则抑制了淋巴细胞的增殖.结论:成功表达了具有生物学活性的sAITRL重组蛋白,AITR-AITRL相互作用在调节淋巴细胞增殖过程中起重要作用.