猪TLR7基因胞外区部分片段的克隆、表达及其重组蛋白的纯化分析

• 作者: 刘磊 和燕玲 房永祥 景志忠 陈国华
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪TLR7胞外区片段 重组蛋白 抗原性
• 年，卷（期）: 2009,（24）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 11450-11452,11463
• 页数: 4页
• 分类号: S828
• 字数: 2895字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2009.24.041

摘要

[目的]获得高表达量的蛋白,为进一步研制单克隆抗体提供较好的免疫原,同时也可为TLR7胞外区该片断蛋白未知区域的结构和功能研究奠定基础.[方法] 应用PCR技术从重组质粒pcDNA3.1/CT-GFP-pTLR7上扩增出编码猪TLR7基因胞外区N端第27～202位氨基酸序列,利用BamHⅠ和HindⅢ酶切位点将其插入到原核表达载体PET30a 中,重组质粒转化BL21(DE3)后,在不同条件下诱导表达.[结果] 经SDS-PAGE分析表明,重组菌表达出约26 kD的融合蛋白,并证实主要以包涵体形式表达,其最佳诱导表达条件是37 ℃、0.5 mmol/L IPTG诱导6 h,表达量可接近50%;纯化的重组蛋白免疫小鼠后,间接ELISA检测抗体效价,结果该蛋白免疫BALB/c小鼠效价达105 .[结论] TLR7胞外区该片断重组蛋白具有很好的抗原性,可以作为单克隆抗体研制的免疫原.