含结核分枝杆菌Ag85A基因的2型重组腺相关病毒的构建和免疫原性

• 作者: 俞守义 孙海峰 欧程山 胡贵方
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 Ag85A 重组腺相关病毒,2型 基因表达 细胞毒性T淋巴细胞活性
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 222-225
• 页数: 4页
• 分类号: R378.911
• 字数: 2893字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3619.2007.03.009

摘要

目的 构建含结核分枝杆菌Ag85A基因的2型重组腺相关病毒并初步研究其免疫原性.方法 采用PCR法从结核杆菌H37Rv株扩增Ag85A基因,将PCR扩增产物克隆于2型腺相关病毒(AAV-2)表达质粒pSNAV中,构建重组质粒pSNAV-Ag85A;用脂质体转染的方法将重组质粒转入BHK-21细胞中,G418筛选得到能表达目的基因混合细胞系BHK-Ag85A;用具有rAAV-2包装功能的辅助病毒感染BHK-Ag85A,纯化后得到rAAV-2-Ag85A;Western blotting检测重组病毒Ag85A基因在BHK-21细胞中的表达;rAAV-2-Ag85A免疫Balb/c小鼠,ELISA法检测血清中抗-Ag85A抗体,51Cr释放分析检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性.结果 PCR扩增的Ag85A基因唐列与GenBank公布的序列一致,纯化后得到的rAAV-2-Ag85A滴度为1×1012 virus particles/ml;Western blotting检测到rAAV-2-Ag85A在BHK-21细胞中能够表达出一相对分子质量为32 000的多肽;rAAV-2-Ag85A免疫的Balb/c小鼠,抗-Ag85A抗体的滴度可达1∶l 024,同时还可激发Ag85A特异性的CTL产生.结论 rAAV-2-Ag85A构建成功,rAAV-2-Ag85A免疫小鼠可以同时诱导体液和细胞免疫反应的出现.rAAV-2-Ag85A对于防止结核分枝杆菌感染,尤其是作为结核病的治疗性疫苗可能具有潜在的应用价值,值得进一步深入研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	欧程山	南方医科大学放射医学系	12	16	2.0	3.0
2	胡贵方	南方医科大学流行病系	41	314	10.0	16.0
3	俞守义	南方医科大学流行病系	142	1125	17.0	26.0
4	孙海峰	南方医科大学流行病系	1	5	1.0	1.0