潮霉素磷酸转移酶(hpt)基因的原核表达、蛋白纯化及其抗体制备

• 作者: 元延芳 罗云波 芦云 许文涛 黄昆仑
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 潮霉素磷酸转移酶(hpt)基因 表达纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 647-652
• 页数: 6页
• 分类号: S188
• 字数: 4087字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2008.04.017

摘要

从转基因玉米(Zea mays)基因组上成功地克隆出潮霉素磷酸转移酶基因(hpt),通过BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切将hpt基因与pET30a进行粘性末端连接,成功构建了pET30a-hpt质粒,并转化到大肠杆菌(Eschenchia coli)BL21中进行蛋白表达.在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下,pET30a-hpt融合表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以可溶性蛋白的形式高效表达了HPT蛋白,并通过金属鏊和层析纯化了目的蛋白.用肠激酶切除了融合蛋白的融合部分之后再一次通过金属鏊和层析,经过透析后获得了HPT纯品,并且使用纯化的HPT蛋白免疫兔制备了特异性强、灵敏度高的多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄昆仑	中国农业大学食品科学与营养工程学院	85	903	16.0	26.0
5	许文涛	中国农业大学食品科学与营养工程学院	109	782	15.0	23.0
9	罗云波		13	161	7.0	12.0
10	元延芳		4	71	4.0	4.0
11	芦云		2	13	2.0	2.0