新霉素磷酸转移酶基因nptⅡ的原核表达、蛋白纯化及其活性鉴定

• 作者: 傅强 刘连盟 王玲 黄世文
• 来源期刊: 中国水稻科学
• 学科: 农学
• 关键词: 新霉素磷酸转移酶基因 原核表达 包涵体 可溶性蛋白 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 326-330
• 分类号: Q943.2|S511.03
• 字数: 4632字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-7216.2011.03.015

摘要

通过PCR方法从pCAMBIAl305载体上克隆了新霉素磷酸转移酶基因nptⅡ的全编码序列,并插入到原核表达载体pET30a(+)中,构建了重组质粒pET30a-nptⅡ.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导,获得了相对分子量为35 kD的表达蛋白,约占全菌总蛋白的45%.表达蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在.用5 mmol/L二硫苏精醇和1%十二烷基肌氨酸钠变性溶解包涵体,经透析后复性获得了可溶忡重组蛋白.将可溶的表达蛋白用Ni<'2+>-NTA亲和层析纯化,获得纯化的NPTⅡ蛋白,电泳谱带扫描分析表明蛋白纯度达95%以上.体外活性检测显示,NPTⅡ蛋白具有良好的生物活性,在浓度30 μg/mL以上时可使卡拉霉素失去抑菌活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	傅强		67	1271	20.0	33.0
2	王玲		46	505	15.0	20.0
3	黄世文		88	961	17.0	26.0
4	刘连盟		31	307	13.0	16.0