人、牛和羊叠朊基因的表达及牛叠朊蛋白抗血清的制备

• 作者: 刘永生 唐江山 孙德惠 张杰 才学鹏 路伟 陈豪泰
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 传染性海绵状脑病 叠朊 朊蛋白 基因表达 抗血清
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 博士后专栏
• 页码范围: 14-18
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.7
• 字数: 4003字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-4333.2008.03.003

摘要

叠朊(Dpl)是朊蛋白(PrP)的横向同源物,两者的功能密切相关.本研究旨在制备能够特异检测重组表达的或者动物组织中Dpl的抗血清,以用于研究Dpl的功能及其与PrP的关系.根据已克隆的汉族人、中国黄牛、甘肃土种羊的Dpl基因,将其Dpl成熟蛋白编码区分别定向克隆到表达载体pET-30a(+)上,将重组表达载体转入E.coli BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达.将表达并纯化的牛重组Dpl免疫4只青紫蓝兔,制备牛Dpl的抗血清,SDS-PAGE分析表明人、牛和羊的重组Dpl在E.coli中获得了高效表达.用Ni-NTA树脂亲和层析和胶洗脱法纯化了上述表达产物,ELISA和West-blot分析表明,制备的牛Dpl抗血清与重组人、牛和羊的Dpl以及牛和羊睾丸组织的Dpl发生了特异性反应,却不与重组人、牛和羊的PrP发生反应.上述结果表明制备的Dpl抗血清可以作为人、牛和羊Dpl的检测试剂和研究材料.