稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立

• 作者: 刘湘涛 吴锦艳 孙世琪 尚佑军 田宏 谢庆阁 郑海学 龚真莉
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪水疱病病毒P1基因 重组逆转录病毒载体 PK-15细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 478-482
• 页数: 5页
• 分类号: Q813
• 字数: 3922字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2008.04.016

摘要

从猪水疱病全长感染性 cDNA 中,应用 PCR 技术扩增到 SVDV 结构蛋白 P1 基因,并在目的片段的 5'端引入 Kozak 序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体 pBABE puro.经 PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒.将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体 pVSV-G 共转染 GP2-293 细胞,收获假型病毒,在 Polybrene 的介导下感染 PK-15 细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆.免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞,发现在不同代次的细胞中均有 SVDV P1 蛋白表达,而且表达的蛋白可被 SVD 阳性血清所识别;同时应用 PCR 技术,可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到 SVD P1 基因.表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达 SVD P1 蛋白,而且可携带外源基因进行传代,具有良好的遗传稳定性.