利用正负筛选打靶载体在猪肾细胞系PK-15细胞中敲除GGTA1基因

• 作者: 季守平 宫锋 常宏宇 李素波 李芳 章扬培 聂亚玲 鲍国强
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪 α-Gal表位 α1,3-半乳糖基转移酶 基因打靶 异种移植
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 234-238
• 分类号: Q813
• 字数: 5247字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2010.03.009

摘要

目的 半乳糖-α1,3-半乳糖(αGal)表位是猪到人异种移植中引起排斥反应的主要异种抗原.通过同源重组敲除猪α1,3-半乳糖基转移酶基因可从异种移植物表面彻底清除αGal表位.本研究的目的 在于利用正负筛选打靶载体定向缺失猪GGTA1基因.方法 构建猪α1,3-半乳糖基转移酶基因正负筛选打靶载体pSL/GT,载体包含了正负筛选标记基因neo和tk,打靶载体线性化后用脂质体包裹转染猪肾细胞系PK-15细胞,利用G418和GANC进行抗性细胞克隆的药物筛选,挑选抗性克隆进行PCR及Southern杂交鉴定.结果 共得到436个抗性细胞克隆,其中31个克隆PCR结果阳性.经Southern杂交鉴定证实,其中1个克隆发生了同源重组,为杂合子.结论 本研究构建了有效的猪GGTA1基因的正负筛选打靶载体pSL/GT,并利用其在猪肾细胞系PK-15细胞中定向缺失GGTA1基因,获得了杂合子GGTA1(+/-)PK-15细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	章扬培	军事医学科学院野战输血研究所	98	679	13.0	20.0
2	常宏宇	第二炮兵总医院儿科	6	30	3.0	5.0
6	宫锋	军事医学科学院野战输血研究所	47	194	7.0	11.0
7	季守平	军事医学科学院野战输血研究所	41	231	8.0	13.0
8	鲍国强	军事医学科学院野战输血研究所	23	89	5.0	8.0
9	李素波	军事医学科学院野战输血研究所	54	223	7.0	11.0
10	李芳	第二炮兵总医院儿科	11	74	6.0	8.0
11	聂亚玲	第二炮兵总医院儿科	6	24	2.0	4.0