定点突变提高豆豉纤溶酶的酶活力和底物特异性的研究

• 作者: 崔堂兵 罗文华 舒薇 郭勇
• 来源期刊: 自然科学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 豆豉纤溶酶 定点突变 酶活力 特异性
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 研究简讯
• 页码范围: 826-832
• 页数: 7页
• 分类号: Q5
• 字数: 5401字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-008X.2008.07.015

摘要

以pBE-DFE质粒为模板,采用反向长距离PCR技术对豆豉纤溶酶(Douchi Fibrinolytic Enzyme,DFE)基因进行定点突变,使位于酶的底物结合区第156位的谷氨酸和第166位的甘氨酸分别替换为丝氨酸和丙氨酸,使临近酶的底物结合区的第169位甘氨酸残基替换为丙氨酸,获得了三个突变体E156S,G166A和G169A.将含突变基因的表达载体转化枯草杆菌wB800,构建了豆豉纤溶酶基因突变体的表达菌株WB800(E156S);WB800(G166A)和WB800(G166A).将3种表达菌株进行液体发酵培养,结果发现发酵上清液中纤溶酶的纤溶活性为460,790和900 U/mL,分别是未突变酶活性(660 U/mL)的70%,115%和136%;3种突变酶对合成底物的H-D-Val-Leu-Lys-pNA的酰胺水解活性是未突变酶的17%,125%和121%.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭勇	华南理工大学生物科学与工程学院	195	2299	24.0	36.0
2	崔堂兵	华南理工大学生物科学与工程学院	47	767	15.0	26.0
3	舒薇	华南农业大学分析测试中心	13	125	7.0	10.0
4	罗文华	华南理工大学生物科学与工程学院	4	59	4.0	4.0