穿膜肽TAT-p38αG融合基因的构建、表达及穿膜特性的鉴定

• 作者: 应希 张家平 张琼 陈渝 黄跃生
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: p38激酶α亚型 穿膜肽 融合基因
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 15-18
• 页数: 4页
• 分类号: R345|R394-33|R394.2
• 字数: 3802字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2008.01.005

摘要

目的 构建穿膜肽TAT-p38αG融合基因,进行原核表达及穿膜特性鉴定.方法 提取人EVC304细胞总RNA,巢式PCR扩增p38αG基因片段,T-A克隆,测序证实片段无误后,将p38αG基因片段亚克隆入原核表达载体pTAT-HA,获得pTAT-p38αG融合基因表达载体.将表达载体转化大肠杆菌,IPTG诱导表达获得TAT-p38αG融合蛋白,并行Ni-NTA柱过柱和超滤纯化,抗His抗体免疫印迹法鉴定.采用荧光素FITC体外标记TAT-p38αG融合蛋白,与EVC304细胞共培养,荧光显微镜下观察其穿膜特性.结果 成功构建了融合基因原核表达载体pTAT-p38αG,并表达出大小约30×103的蛋白产物,与融合蛋白TAT-p38αG理论计算值相符.细胞实验结果显示,TAT-p38αG能呈浓度依赖性方式转导进入EVC304细胞.结论 TAT-p38αG融合蛋白具有良好的穿膜特性,研究为下一步鉴定TAT-p38αG融合蛋白对p38α激酶的抑制作用奠定了良好的实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	应希	第三军医大学西南医院全军眼科中心	15	46	4.0	5.0