假单胞菌褐藻胶裂合酶活性片段的基因克隆及重组表达条件的优化

• 作者: 古静燕 李天东 王怀玉 罗英 阮期平 韩文君
• 来源期刊: 四川师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 假单胞菌 褐藻胶裂合酶 基序 基因克隆 表达
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 页码范围: 242-246
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4630字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-8395.2008.02.029

摘要

为分析假单胞菌(Pseudomonas)膜周质中褐藻胶裂合酶(alginate lyase,AlgL)的最小活性单元,进行了活性片段的初步研究.用简并引物克隆MY01菌株中AlgL基因的片段,用特异引物扩增目的序列并克隆入pBAD gⅢ/A载体,转化大肠杆菌并筛选阳性克隆.进行L-阿拉伯糖诱导表达条件的优化,超声破碎重组菌体并分离水溶性组分作为粗酶,以褐藻酸钠为底物进行酶解反应,在235 nm测定产物的吸收值.结果该基因片段300 bp大小,GenBank收录号为AY736133,所编码的氨基酸序列中含有基序"NNHSYW",且在系统发育树中与假单胞菌的AlgL聚类.在优化条件下获得粗酶,酶解反应产物在235 nm有显著吸收,表明重组融合蛋白具有褐藻胶裂合酶活性.褐藻胶裂合酶的研究较多,但其活性片段的重组表达研究少见报导.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李天东	绵阳师范学院分子生物学与生物制药重点实验室	16	142	7.0	11.0
2	罗英	绵阳师范学院分子生物学与生物制药重点实验室	51	439	13.0	19.0
3	阮期平	绵阳师范学院分子生物学与生物制药重点实验室	73	438	12.0	18.0
4	古静燕	绵阳师范学院分子生物学与生物制药重点实验室	8	34	3.0	5.0
5	王怀玉	绵阳师范学院分子生物学与生物制药重点实验室	18	142	6.0	11.0
6	韩文君	绵阳师范学院分子生物学与生物制药重点实验室	11	94	3.0	9.0