海洋假单胞杆菌褐藻胶裂解酶基因在大肠杆菌中的高效表达和活性检测

• 作者: 张瑾 李兆杰 杨文鸽 梁君妮 薛长湖 赵玉然
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 学科: 工学
• 关键词: 褐藻胶裂解酶 大肠杆菌 表达 酶活性 体系优化
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 5-9
• 页数: 5页
• 分类号: TS2
• 字数: 3698字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-990X.2007.02.002

摘要

利用PCR方法从假单胞杆菌基因组DNA扩增胞外褐藻胶裂解酶的全基因和缺损片段,构建表达质粒pQE30-aly32和pQE30-aly165,并在大肠杆菌M15中成功表达.表达的重组蛋白大部分存在于包涵体中,经洗涤,变性和复性,镍柱亲和层析纯化,获得了电泳纯的Aly32和Aly165.酶活性检测发现,仅Aly165具有较强活性,108 u/mg,该酶对poly(G)和poly(M)都有活性,对poly(M)更敏感.对表达体系进行优化,确定IPTG的最佳浓度为0.6mmol/L,最佳诱导菌液密度OD600为0.5～0.6,最佳表达时间为3h,28℃低温诱导可以提高重组蛋白的可溶性,可溶性蛋白相对表达量达到25%.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薛长湖	中国海洋大学食品科学与工程学院	475	6355	39.0	54.0
2	李兆杰	中国海洋大学食品科学与工程学院	137	1975	26.0	39.0
3	杨文鸽	中国海洋大学食品科学与工程学院	194	2879	27.0	40.0
5	赵玉然	中国海洋大学食品科学与工程学院	5	20	4.0	4.0
8	梁君妮	中国海洋大学食品科学与工程学院	2	8	2.0	2.0
9	张瑾	中国海洋大学食品科学与工程学院	15	92	6.0	9.0