降钙素基因相关肽真核表达载体pcDNA3.1/CGRP的构建

• 作者: 周卸来
• 来源期刊: 杭州师范学院学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 降钙索基因相关肽 pcDNA3.1 DNA重组
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 305-309
• 页数: 5页
• 分类号: R339.2
• 字数: 3167字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建带有大鼠降钙素基因相关肽基因(rCGRP)的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)/rCGRP.方法 应用Trizol试剂从SD大鼠脑组织提取总RNA,RT-PCR扩增rCGRPcDNA(PCR引物上加上双酶切位点),产物通过Hind Ⅲ和BamH I酶切、纯化、连接,将目的 基因插入真核表达质粒载体pcDNA3.1(+),再将重组质粒转化感受态细菌,通过氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,再经PCR、酶切和测序鉴定所得克隆.结果 (1)RT-PCR产物电泳分析扩增产物行1%琼脂糖凝胶电泳后可见一条特异的片段,和rCGRPcDNA大小相吻合;(2)重组克隆鉴定①PCR鉴定.PCR产物行1%琼脂糖凝胶电泳后可见一条特异的片段,和rCGRPcDNA大小相吻合;②酶切鉴定,抽提质粒经双酶切.酶切产物行1%琼脂糖凝胶电泳后在凝胶成像仪下可见两特异性条带,分别和pcDNA3.1(+)和rCGRPcD-NA大小相吻合;③DNA测序,测序结果经BLAST分析,与rCGRP基因编码区全长序列完全一致.结论 (1)大鼠脑组织中有rCGRP的表达;(2)通过RT-PCR及基因重组技术成功构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)/rCGRP.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周卸来	杭州师范大学临床医学院外科学教研室	42	156	7.0	9.0