从大肠杆菌中表达、纯化宁乡猪N-乙酰谷氨酸合成酶并制备其多克隆抗体

• 作者: 伍国耀 印遇龙 宋小燕 张建社 李铁军 王文策 石常友 耿梅梅 褚武英
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 医学
• 关键词: 宁乡猪 N-乙酰谷氨酸合成酶 多克隆抗体 免疫印迹 免疫组化
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 750-755
• 页数: 6页
• 分类号: R332
• 字数: 3555字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2008.06.009

摘要

N-乙酰谷氨酸合成酶催化生成的N-乙酰谷氨酸(NAGS)对于哺乳动物尿素循环第一个酶--氨基甲酰磷酸合成酶Ⅰ变象异构激活是必需的.N-乙酰谷氨酸合成酶定位于肝脏和小肠线粒体基质中,通过提供N-乙酰谷氨酸调节氨基甲酰磷酸合成酶Ⅰ的活性来调节尿素合成.我们用RT-PCR方法从宁乡猪肝脏中扩增了N-乙酰谷氨酸合成酶的开发阅读框,并将此基因连接到原核表达载体上,构建了pET-NAGS质粒.将重组质粒转化到Ecoli BL21(DE3),在IPTG诱导下表达His-NAGS融合蛋白.通过SDS-PAGE,得出NAGS分子量约为40kDa.一步亲和层析纯化后,我们将纯化后的NAGS蛋白注射到新西兰大白兔中制备多克隆抗体.通过免疫组化和免疫印迹测试抗体,结果表明此抗体有较好的抗原性和特异性.据我们所知,这是第一次在大肠杆菌中表达来源于宁乡猪的NAGS.