血管内皮生长因子C正、反义真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 代远斌 张剑波 朱鹏 王继见
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 血管内皮生长因子C 载体构建
• 年，卷（期）: 2008,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1451-1453
• 页数: 3页
• 分类号: Q782
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2008.12.017

摘要

目的 克隆血管内皮生长因子C(VEGF-C)基因,构建VEGF-C正、反义真核表达载体,鉴定并分析其基因序列.方法 从处于对数生长期的人SGC-7901细胞中提取组织总RNA,用RT-PCR方法 扩增出VEGF-C基因的正、反义全长cDNA.利用大肠杆菌转化并制备质粒pCI-neo和pcDNA3.分别用Xba Ⅰ+EcoR Ⅰ及Hind Ⅲ+EcoR Ⅰ双酶切两组质粒和VEGF-C cDNA,并将正、反义VEGF-C cDNA克隆到真核表达载体pcDNA3和pCI-neo中.酶切鉴定、质粒双向测序鉴定重组基因.结果 扩增出VEGF-C基因全长cDNA,大小约1.3kb.克隆出正、反义重组质粒为pcDNA3-sense VEGF-C,pCI-neo-antiseme VEGF-C,电泳结果 显示条带大小约6.8kb.碱基测序证实重组质粒中导入的DNA片段碱基序列与预期的设计路线相符且两片段互补、方向相反.结论 正确克隆VEGF-C基因,成功构建了VEGF-C正、反义真核表达载体,为下一步研究反义VEGF-C转染VEGF-C基因高表达的肿瘤细胞后对其体外生长的影响创造了条件,也为进一步研究VEGF-C在胃癌新生淋巴管的形成和转移中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王继见	重庆医科大学附属二院普外科	65	250	9.0	12.0
2	代远斌	重庆医科大学附属二院普外科	61	356	11.0	14.0
3	朱鹏	重庆医科大学附属二院普外科	21	58	5.0	6.0
4	张剑波	重庆医科大学附属二院普外科	15	35	4.0	5.0