pEGFP-P21真核表达载体构建及在AGS细胞的表达定位

• 作者: 李一荣 王琳 窦丽芳 胡丽华
• 来源期刊: 临床血液学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: P21WAF 基因 基因表达 绿色荧光蛋白 人胃癌细胞
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 296-298
• 页数: 3页
• 分类号: Q343.1
• 字数: 2272字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-2806-B.2008.03.003

摘要

目的:构建人细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白(cyclin2dependent kinase inhibitor)P21WAF基因的真核表达载体pEGFP-P21,建立稳定表达P21蛋白与pEGFP融合蛋白的AGS细胞系,,为进一步研究P21对下游基因的调节作用提供实验基础.方法:用PCR法在pCDNA3-P21质粒中定向插入EcoR1、BamH1酶切位点,扩增P21 cDNA;采用亚克隆技术构建绿色荧光蛋白pEGFP-C2-P21融合基因表达载体;PCR法、双酶切及测序鉴定.脂质体转染试剂将重组载体转染人胃癌AGS细胞系,G418筛选20天挑取表达pEGFP-P21的抗性克隆扩大培养、传代.荧光显微镜直接观察pEGFP-p21在细胞中的分布和定位,流式细胞术分析细胞周期.结果:鉴定结果表明重构载体pEGFP-P21序列和方向正确,借助绿色荧光蛋白直观观察P21定位于AGS细胞核.细胞周期分析细胞阻滞与G1/S期.结论:成功建立稳定表达pEGFP-P21的AGS细胞株,P21在细胞核内发挥周期阻滞的作用,P21对细胞周期的影响可能为其调节其他因子是始动因素,为进一步研究P21基因的功能奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡丽华	华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科	219	1037	13.0	23.0
2	王琳	华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科	299	2005	21.0	35.0
3	李一荣	华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科	53	158	6.0	8.0
4	窦丽芳	华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科	4	8	2.0	2.0