重组人IL-12在CHO细胞中高效表达克隆的筛选及产物的生物学活性分析

• 作者: 于红 吕锐 张文卿 李丹
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素-12 中国仓鼠卵巢细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 564-566
• 页数: 3页
• 分类号: R392.12
• 字数: 3307字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2008.06.007

摘要

目的:重组人白细胞介素-12(rhIL-12)真核表达质粒(pcDNA6/v5-his-pT0)转染CHO细胞,筛选高效稳定表达克隆;并对表达产物进行生物学活性分析.方法:采用聚乙烯亚胺(PEI)将pcDNA6/v5-his-p70转入CHO细胞;用杀稻瘟菌素(Blasticidin)筛选阳性表达克隆,并进行单克隆扩增;RT-PCR进行表达鉴定;ELISA检测各克隆rhIL-12的表达量;应用淋巴细胞增生实验及细胞内细胞因子染色方法分析rhIL-12的生物学活性.同时,对筛选出的阳性克隆进行表达稳定性观察.结果:RT-PCR结果显示,选取的20个阳性克隆均可扩增出1 800 bp的特异性片段;ELISA表明,其中6个克隆rhIL-12表达水平较高(312.69～719.10 ng/L),最高表达量达到719 ng/L(5×104个细胞,48 h);生物学活性分析表明,表达的rhIL-12可明显提高献血员外周血PBMC对PHA/HCMV反应的C34/IFN-γ及CD8/IFN-γ双标记阳性细胞克隆的频数;并且,可明显提高献血员外周血PBMC对PHA/HCMV刺激的增生反应效能.阳性克隆在维持量的筛选药物(2 ng/LBlasticidin)压力下传代6个月,其表达水平无明显变化.结论:rhIL-12真核表达载体(pcDNA6/v5-his-p70)能在CHO细胞中高效稳定表达;其表达产物具有良好的生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于红	青岛大学医学院病原生物学实验室	79	593	12.0	21.0
2	张文卿	青岛大学医学院病原生物学实验室	61	319	10.0	14.0
3	李丹	青岛大学医学院病原生物学实验室	57	155	7.0	10.0
4	吕锐	青岛大学医学院病原生物学实验室	44	226	9.0	12.0