mGITRL真核表达质粒的构建及其在Lewis细胞中的表达

• 作者: 仝佳 孙长贵 成军 朱燕萍 王胜军 胡正军 许化溪 马洁 鲍俊峰
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: GITRL 细胞转染 肿瘤
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 107-110
• 页数: 4页
• 分类号: Q78|R392
• 字数: 2576字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2008.02.004

摘要

目的:构建含小鼠GITRL基因的真核表达质粒pIRES2-eGFP/mGITRL,体外转染小鼠肺癌细胞株Lewis细胞.方法:利用PCR方法扩增mGITRL基因,克隆至pIRES2-eGFP载体,选择阳性克隆并进行序列测定.以电穿孔法转染Lewis细胞,通过G418筛选,获得稳定表达细胞株.结果:构建了真核表达质粒pIRES2-eGFP/mGITRL,基因测序与GenBank中发表的序列完全一致,体外转染Lewis细胞,经G418筛选,体外传代30代以上,RT-PCR及流式细胞仪检测该细胞株稳定表达mGITRL.结论:成功构建了真核表达质粒pIRES2-eGFP/mGITRL,并在小鼠Lewis细胞中稳定表达,为进一步研究GITRL的生物学功能提供研究基础.