TNFα-Tumstatin融合基因腺病毒载体的构建及其在人脐带间质干细胞中的表达

• 作者: 乔纯 司煜安 周忠海 周洪兴 张蕾蕾 徐静 朱伟 李继刚 王兴忠 许文荣 钱晖 陈圆
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒载体 融合基因 同源重组 细胞转染
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 185-188,192,彩插1
• 页数: 6页
• 分类号: R392.12
• 字数: 3250字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2008.03.001

摘要

目的: 构建携带绿色荧光蛋白的TNFα-Tumstatin融合基因腺病毒表达载体,转染人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs).方法: 设计含有GM-CSF信号肽序列和BglⅡ及HindⅢ酶切位点的引物,PCR扩增TNFα-Tumstatin,将扩增产物亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后转化含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中同源重组.筛选获得含有融合基因的重组腺病毒质粒,酶切鉴定并测序.重组病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞,经过包装、扩增后感染hUCMSCs并检测细胞内融合基因的表达.结果: 重组腺病毒质粒经PCR和PacⅠ酶切鉴定,证实含有TNFα-Tumstatin融合基因,测序结果和设计片段的序列一致.重组腺病毒感染的hUCMSCs表达绿色荧光蛋白和融合基因.结论: 成功构建了TNFα-Tumstatin融合基因的腺病毒表达载体,能高效率感染hUCMSCs,为进一步研究融合基因修饰的hUCMSCs抗肿瘤效应奠定了基础.