hHGF腺病毒载体的构建及其在人脐带间质干细胞中的表达

• 作者: 吴晓丹 李汉华 王梅 许文荣 许晓蒙 谢颖 赵亚娟 陈圆
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 肝细胞生长因子 人脐带间质干细胞 腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 190-193,后插1
• 分类号: R373
• 字数: 3618字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2010.03.002

摘要

目的:构建人重组肝细胞生长因子(human hepatocyte growth factor,hHGF)基因腺病毒载体(Ad-HGF),转染人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hucMSCs),为转基因治疗提供实验基础.方法:设计含有SalⅠ及XbaⅠ酶切位点的引物,PCR扩增hHGF,将扩增产物克隆到带有绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)标记的pAdTrack-CMV穿梭质粒上.重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183中同源重组,筛选获得含有hHGF的重组腺病毒质粒,PCR、酶切鉴定并测序.重组病毒质粒用PacⅠ酶切线性化,脂质体转染293A细胞,经3轮扩增,制备高效表达的AdGFP/HGF,并转染hucMSCs.结果:重组腺病毒质粒经PCR和SalⅠ,XbaⅠ酶切鉴定,证实含有HGF基因,测序结果和设计片段的序列一致.荧光显微镜下发现293A细胞发光率几乎为100%,感染的hucMSCs亦可表达绿色荧光蛋白.结论:成功构建了hHGF腺病毒表达载体,并获得高滴度的病毒, 能高效感染hucMSCs,为后续研究奠定了基础.