大鼠对氧磷酶1真核表达载体的构建及在体外的表达

• 作者: 兰芬 史雪梅 徐国鹏 杨硕 熊盛道 熊维宁 胡琼洁 许淑云 陆小霞
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 铜绿假单胞菌 对氧磷酶 密度感知 基因的表达与调控
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 206-209
• 页数: 4页
• 分类号: Q784
• 字数: 3430字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2008.03.004

摘要

目的 构建大鼠对氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)真核表达载体,并检测其在体外培养细胞中的表达及功能,为进一步探索运用其进行基因防治肺部感染奠定基础.方法 利用RT-PCR扩增大鼠PON1编码区全长序列,克隆入pcDNA 3.1(+),鉴定无误后,脂质体转染A549细胞及293细胞, Western印迹检测蛋白表达,并检测其芳香酯酶活性及对铜绿假单胞菌密度感知系统信号分子N-酰基高丝氨酸内酯(N-acylhomoserine lactones,AHLs)的水解功能.结果 分别从大鼠肝组织中扩增出1 153 bp片段,克隆入表达载体后进行酶切鉴定和测序结果正确.转染细胞后能够表达目的 蛋白,该蛋白具有芳香酯酶和AHLs内酯酶活性.结论 成功构建了含有大鼠PON1真核表达载体,质粒能够在真核细胞中表达,能够有效地水解铜绿假单胞菌密度感知系统信号分子.